脂质体负染试验实例：格微GVG-100辉光放电仪

    脂质体（Liposome）是一种由磷脂双分子层构成的囊泡结构，广泛应用于药物传递系统。其独特的结构可以同时封装亲水性和疏水性物质，从而显著提高药物的生物利用度，减少副作用并增强靶向性。此外，脂质体在基因治疗中用于传递DNA和RNA，在疫苗开发中作为佐剂以增强免疫反应，并在化妆品中提高活性成分的渗透性。脂质体的质量，如粒径、均一性和包封率等，对其性能至关重要，影响生物相容性、清除率、细胞摄取、分布与靶向性，以及药物释放特性和稳定性。

透射电子显微镜（TEM）是评估脂质体囊泡结构、粒径和均一性等形态信息的常用工具。由于脂质体主要由C、H等轻元素构成，需使用负染色法进行观测。负染过程中，样品被滴加并吸附在载网上的无定形碳支持膜上，并使用重金属染料染色。碳支持膜在制备初期具有较强亲水性，但随着时间的推移，制备后的碳膜会逐渐老化疏水。脂质体为亲水性颗粒，疏水的碳膜会严重影响其与染料的吸附，甚至促进样品聚集，造成各种“伪影”，从而影响TEM观测的准确性。

辉光放电处理是目前常用的一种碳膜表面改性方法。经气体辉光放电处理后，碳膜表面带负电荷，表现出亲水性，使样品更易吸附在碳膜上，分散也更均匀，从而改善负染效果。本实验对比了碳膜亲水性处理与否对脂质体负染制样效果的影响。结果表明：使用格微GVG-100对碳膜进行亲水处理显著提升了脂质体颗粒的分散性和负染效果。

试验方法

脂质体的制备

吸取5 uL DMPC/DHPC bicelles母液（~ 5 mM DMPC，q=0.5），用PBS稀释100倍，水浴超声3 min后，再用PBS稀释3倍，即得DMPC脂质体样品。

负染制样

使用格微GVG-100辉光放电仪对铜网（薄纯碳支持膜）进行亲水性处理（10 mA，35s）。然后，滴加3.5 μL稀释后的脂质体样品至处理后的铜网，停留1分钟。随后，用3滴（~30uL）染液（UranyLess EM Stain）快速染色，每次染色前后用滤纸将多余液体吸除，最终在最后一滴染液上停留~1 min。染色后，用滤纸从背面将铜网多余液体的吸除，室温下风干备用。对照组除铜网不进行亲水性处理外，其余操作完全一致。

仪器设备

辉光放电仪：格微GVG-100；某品牌透射电子显微镜

试验结果：

图1 辉光放电处理对碳膜亲水性的改善。
 

                               左：辉光放电处理前；                                                  右：辉光放电处理后（10 mA，35s）

图2 UranyLess EM Stain负染的脂质体TEM图片，碳膜未经格微GVG-100辉光放电仪处理。

图3 UranyLess EM Stain负染的脂质体TEM图片，碳膜经格微GVG-100辉光放电仪处理。

试验分析

• 辉光放电处理显著提高了碳支持膜的亲水性：未经处理的碳膜上，水滴呈半球状且难以扩散，显示出碳膜表面疏水（图1左）；而辉光放电处理后，相同体积的水滴可轻松扩散，表明碳膜亲水性显著提升（图1右）。
• 辉光放电处理显著提高了脂质体样品的负染效果：相同的脂质体样品及制样流程下，未经亲水性处理的碳膜载网（图2）上，脂质体颗粒团聚严重，染料分布不均，无法进行粒径分析；而经亲水性处理的载网（图3）上，脂质体颗粒分散均匀，染料分布良好，负染效果显著提升。